載體蛋白偶聯(lián)
肽-載體蛋白銜接多用于制備抗毒素類抗體,單獨(dú)的單個(gè)通常通常小小的不足以激起充分的免疫反應(yīng),而帶有很多抗原
表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細(xì)胞,進(jìn)一步誘導(dǎo)B細(xì)胞免疫反應(yīng)。
合生生物偶聯(lián)蛋白主要如下幾種:
KLH(Keyhole Limpet Hemocyanin),即血藍(lán)蛋白,由于KLH比BSA有更高的免疫原性,因此是常被替換的載體蛋白。
BSA(牛血清白蛋白),即牛血清白蛋白,屬于十分穩(wěn)定的和可溶的白蛋白。BSA的不利之處在于在很多實(shí)驗(yàn)中,它被當(dāng)
作封閉劑使用,如果多肽-BSA偶聯(lián)物的抗血清用于這樣的檢測(cè)分析中,通常會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性,因?yàn)檫@些血清含有抗BSA的
抗體。
OVA(Ovalbumin),即雞卵白蛋白,它可作為第*二載體蛋白去驗(yàn)證抗體是否僅針對(duì)靶向而并非載體蛋白(如BSA)。
所有可攜帶的基基反應(yīng)的功能基團(tuán)經(jīng)修飾都可被替換為發(fā)生共軛反應(yīng)。合生生物偶聯(lián)反應(yīng),其中十分常見(jiàn)的有以下幾種:
碘乙酰胺(碘乙酰胺)
馬來(lái)?yè)诫s(馬來(lái)酰亞胺)
烷基鹵(鹵代烷)
MAP與帶有載體蛋白的肽
在支鏈賴氨酸上合成四或八個(gè)拷貝的肽;因此,MAP肽的作用類似于大蛋白。
MAP肽直接與佐劑一起注射以產(chǎn)生抗體。不需要載體蛋白。
MAP技術(shù)有利于N末端或內(nèi)部肽,因?yàn)樵撾耐ㄟ^(guò)C末端連接。相反,KLH-結(jié)合傾向于C-末端肽。但是,KLH載體可能會(huì)
引起空間位阻。
由于MAP肽的結(jié)構(gòu),其滴度可能比KLH綴合的肽略高。MAP設(shè)計(jì)大大程度地提高了抗原濃度,因?yàn)楹铣傻碾目乖妓?/font>
產(chǎn)品總重量的95%。
使用MAP,每次都可以使用已知量的肽進(jìn)行免疫,從而可以更好地控制實(shí)驗(yàn)條件。