重組蛋白A預(yù)裝柱 （rec-Protein A Column）

重組蛋白A預(yù)裝柱規(guī)格

產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：GD A001-1mL; GD A001-2mL； GD A001-5mL；GD A001-50mL；GD A001-150mL；
生產(chǎn)批次：見產(chǎn)品標(biāo)簽
有效期：4℃長期存放，有效期三年

重組蛋白A預(yù)裝柱簡(jiǎn)介

產(chǎn)品形式

本產(chǎn)品通過現(xiàn)代基因工程重組技術(shù)，將蛋白A基因在大腸桿菌中高效表達(dá)，可溶性表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化后共價(jià)偶聯(lián)于填料上。上述產(chǎn)品按批次質(zhì)控后、依照上保存方式，保存于20%乙醇中待用。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

天然蛋白A或蛋白G、蛋白A/G 可與多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc端特異性結(jié)合。使用的重組rec-Protein A 或rec-Protein G、 rec-Protein A/G是通過基因工程-重組蛋白的方法表達(dá)獲得。由于重組表達(dá)的rec-Protein A或rec-Protein G、rec-Protein A/G去除了除Fc端以外的其他非特異性結(jié)合位點(diǎn)，特異性更好。
本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術(shù)，將填料中有限的羥基(-OH)結(jié)合位點(diǎn)充分活化，使得單位體積中結(jié)合更多蛋白A、蛋白G、蛋白A/G，產(chǎn)品最終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)

rec-Protein A/Sepharose 比值：
28~35mg rec-Protein A/ml Sepharose
結(jié)合能力：
50-65mg人IgG / ml填料（上樣1次）
42-60mg兔IgG / ml填料（上樣1次）
rec-Protein A分子量：
34.85 KDa
每分子rec-Protein A可結(jié)合IgG位點(diǎn)數(shù)：
4個(gè)
每分子rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點(diǎn)數(shù)：
無
線性流速：
100-150 cm/h
耐壓指數(shù)：
0.008 MPa

產(chǎn)品保存

產(chǎn)品儲(chǔ)存于2-8℃

rec-Protein A預(yù)裝柱純化IgG抗體步驟

以下實(shí)驗(yàn)方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rec-Protein A的結(jié)合能力不同，具體情況請(qǐng)參考表1。
1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對(duì)1× PBS（pH 7.4）透析過夜；
2. 將rec-Protein A-Sepharose裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；
3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復(fù)2遍（或?qū)悠?次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動(dòng)，結(jié)合30 min）；
4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；
5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM甘氨酸，pH 2.7），用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。
6. 加入5倍柱體積再生緩沖液（100 mM甘氨酸，pH 2.0），再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。
再向?qū)游鲋尤?0倍柱體積, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱保存。

表1 Immunoglobulin Reactivity with Protein A & Protein G

IgG類型	Protein A	Protein G	IgG類型	Protein A	Protein G
人 IgG1	++++	++++	大鼠 IgG2b	-	++
人 IgG2	++++	++++	大鼠 IgG2c	+	++
人IgG3	-	++++	大鼠 IgM	+/-	-
人IgG4	++++	++++	兔 Ig	++++	+++
人IgA	++	-	雞 Ig	-	+
人n IgD	++	-	倉鼠 Ig	+	++
人IgE	++	-	豚鼠 Ig	++++	++
人 IgM	++	-	牛 Ig	++	++++
小鼠 IgG1	+	++++	馬	++	++++
小鼠 IgG2a	++++	++++	奶牛	++	++++
小鼠 IgG2b	+++	+++	豬	+++	+++
小鼠 IgG3	++	+++	綿羊	+/-	++
小鼠 IgM	+/-	-	山羊	-	++
大鼠 IgG1	-	+
大鼠 IgG2a	-	++++