泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量，且具性價(jià)比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術(shù)服務(wù)。我們?cè)谒幬锟贵w發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項(xiàng)目開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)。基于噬菌體展示技術(shù)（Phage Display Technology）平臺(tái)的服務(wù)，泰克生物能夠?yàn)榭蛻籼峁┮幌盗邪ǖ幌抻谕迷?、鼠源、羊源、駝源及牛源等不同物種的單克隆抗體制備服務(wù)，及其配套的完整可追溯性文件體系。
噬菌體展示技術(shù)（即：納米抗體技術(shù)）是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，通常為M13噬菌體的P3蛋白，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。噬菌體展示的優(yōu)勢(shì)在于其展示納米抗體文庫(kù)中變異抗體基因的多樣性，各個(gè)重組噬菌體（常用噬菌體為M13噬菌體）表面展示出不同的抗原結(jié)合域，相較于傳統(tǒng)雜交瘤方法，噬菌體展示技術(shù)在抗體基因展示與篩選層面則具有非常突出的效率優(yōu)勢(shì)（如雜交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合細(xì)胞中，大概4個(gè)融合子；而噬菌體展示輕松可以獲得108-109個(gè)正確抗體序列）。
█ 噬菌體展示抗體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)
泰克生物可為客戶提供駝源VHH納米抗體庫(kù)，scFv抗體庫(kù)，F(xiàn)ab抗體文庫(kù)構(gòu)建以及篩選服務(wù)。其中VHH納米抗體庫(kù)，又稱為駝源重鏈抗體文庫(kù)，抗體分子量大小為15kDa，是駝源動(dòng)物產(chǎn)生的一種抗體。目前被廣泛應(yīng)用于CarT/Car-NK治療性的駝源VHH抗體（又被稱為納米抗體）噬菌體展示發(fā)現(xiàn)路徑如圖1所示：
圖1基于噬菌體技術(shù)平臺(tái)的駝源VHH抗體發(fā)現(xiàn)服務(wù)
泰克生物還可以提供一系列的抗體驗(yàn)證服務(wù)，例如：通過(guò)GST pull-down或CO-IP策略檢測(cè)展示的蛋白質(zhì)與其他分子之間的相互作用或分離特定目標(biāo)、抗原抗體BLI親和力測(cè)定、細(xì)胞功能驗(yàn)證及細(xì)胞系體外驗(yàn)證等。
泰克生物提供的納米抗體庫(kù)具有豐富的多樣性和規(guī)模，是篩選所有抗原類型以及選擇具有高親和力的功能性抗體的理想選擇。憑借多年的經(jīng)驗(yàn)，我們開(kāi)發(fā)了多種噬菌體平臺(tái)，可以為您定制特定的納米抗體文庫(kù)。如果您有興趣開(kāi)展噬菌體展示抗體項(xiàng)目，或者其他相關(guān)服務(wù)，例如抗體測(cè)序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等，請(qǐng)聯(lián)系我們！
█ 服務(wù)內(nèi)容和周期
步驟 | 服務(wù)內(nèi)容 | QC標(biāo)準(zhǔn) | 周期 |
Step1:蛋白表達(dá) | (1) 密碼子優(yōu)化+基因模板合成+表達(dá)載體構(gòu)建； (2) 質(zhì)粒抽提+轉(zhuǎn)染（哺乳表達(dá)系統(tǒng)）目的蛋白檢測(cè)（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表達(dá)放大+蛋白親和純化； | 交付：表達(dá)載體，克隆甘油菌，重組蛋白3-3.5mg，純度>85%，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
| 4-6周 |
Step2:動(dòng)物免疫 | (1) 動(dòng)物免疫4次，加強(qiáng)免疫一針，共計(jì)免疫5針； (2) 免疫前采集陰性血清，第4針采血進(jìn)行ELISA檢測(cè)血清效價(jià)； (3) 若第4針血清抗體效價(jià)（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）滿足要求，則采血前7天再次加強(qiáng)免疫1針，如不滿足要求，則繼續(xù)常規(guī)免疫； (4) 效價(jià)合格，采血分離單核細(xì)胞； | 動(dòng)物：背景清晰（年齡，性別，防疫情況）； 免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104； 采血：數(shù)量100ml以上； PBMC細(xì)胞：>105/vial
| 8-10周 |
Step3:模板cDNA制備 | (1) PBMC總RNA提?。≧NA提取試劑盒） (2) 高保真RT-PCR制備cDNA（反轉(zhuǎn)錄試劑盒） | cDNA：反轉(zhuǎn)后>1ug/ul，膠圖分布均勻； cDNA模板總量>150ug； | 1 天 |
Step4:噬菌體展示文庫(kù)構(gòu)建 | (1) 以cDNA為模板，兩輪PCR法擴(kuò)增VHH基因； (2) 噬粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化： VHH基因拼接噬菌粒載體，電擊轉(zhuǎn)化TG1宿主菌，構(gòu)建抗體庫(kù)，混合建庫(kù)電擊次數(shù)不低于30次（單靶點(diǎn)建庫(kù)，電擊次數(shù)不低于15次）； (3) 鑒定：隨機(jī)挑選24個(gè)克隆，PCR鑒定陽(yáng)性率+插入率 (4) 輔助噬菌體準(zhǔn)備：M13噬菌體擴(kuò)增+純化； (5) VHH展示文庫(kù)救援 | 文庫(kù)陽(yáng)性率：>90%； 文庫(kù)插入性率：>90%； 庫(kù)容：>108 | 1-2周 |
Step5:文庫(kù)篩選（3輪篩選）(固相篩選) | (1) 抗原包被（單個(gè)蛋白篩選，常規(guī)默認(rèn)是固相篩選法或磁珠分選；細(xì)胞篩選方法需要單獨(dú)核算費(fèi)用）； (2) 默認(rèn)3輪篩選：壓力篩選，較大限度去除非特異性抗體； (3) 挑取96個(gè)克隆擴(kuò)增噬菌體+IPTG誘導(dǎo)表達(dá)+ELISA檢測(cè)陽(yáng)性克?。?/span> (4) 挑取全部陽(yáng)性克隆進(jìn)行基因測(cè)序（>20個(gè)，多達(dá)96個(gè)）； | ELISA陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：P/N>3； VHH篩選標(biāo)準(zhǔn)：CDR氨基酸序列不同 | 2-3周 |
Step6:抗體驗(yàn)證（體外驗(yàn)證） | (1) 將獲得的抗體序列構(gòu)建合適的表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)+親和純化+抗體蛋白定量； (2) Elisa驗(yàn)證抗體與抗原結(jié)合，進(jìn)行下游驗(yàn)證（交付EC50數(shù)據(jù)）; (3) BLI法驗(yàn)證抗體親和力； (4) 細(xì)胞功能驗(yàn)證：流式驗(yàn)證； (5) 驗(yàn)證細(xì)胞系（抗原受體過(guò)表達(dá)細(xì)胞系）； | 交付：表達(dá)載體，克隆菌株，表達(dá)菌株，重組抗體蛋白1mg，純度90%； 快速親和力測(cè)定結(jié)果； | 4-6周 |
█ 服務(wù)優(yōu)勢(shì)
? 物種適應(yīng)性廣泛：人，鼠，兔，羊，羊駝，駱駝，魚等物種的單抗開(kāi)發(fā)均兼容（不適用牛源單抗開(kāi)發(fā)）
? 技術(shù)平臺(tái)成熟：噬菌體展示技術(shù)提供1級(jí)免疫文庫(kù)的建庫(kù)庫(kù)容為108-109，插入率均滿足>95%，篩選獲得的抗體親和力普遍處于nM- pM級(jí)別
? 開(kāi)發(fā)周期短：獲得PBMC后，建庫(kù)到篩選獲得抗體序列，3-4周
? 產(chǎn)品交付標(biāo)準(zhǔn)高：針對(duì)免疫庫(kù)，交付免疫前后血清，抗體展示文庫(kù)，篩選洗脫產(chǎn)物，抗體序列
? 文庫(kù)淘篩定制化（噬菌體展示方式）：根據(jù)客戶需求不同以及靶點(diǎn)性質(zhì)不同，會(huì)設(shè)計(jì)不同的篩選方法，如固相，固相/液相和細(xì)胞篩選
? 實(shí)驗(yàn)記錄可追溯：QC質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（含RNA提取，cDNA制備等），中英文實(shí)驗(yàn)報(bào)告，手寫實(shí)驗(yàn)記錄本
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