在抗體純化的經(jīng)典三步法
親和捕獲+陽離子交換+陰離子交換中
早期已介紹過百林科陰離子交換層析介質(zhì)
詳見
今天，重點介紹一下百林科陽離子交換層析介質(zhì)。
百林科陽離子交換層析介質(zhì)豐富多樣，依據(jù)基架類型，分為MaXtar® 基架和Chromstar® 基架，兩者主要區(qū)別在于耐壓，MaXtar® 基架通常可以耐受0.5MPa壓力，Chromstar®基架可以耐受0.3MPa壓力；根據(jù)配基的類型，可以分為SP(強陽)、S(強陽)、CM(弱陽)幾種類型。
百林科MaXtar® 基架的
幾種陽離子交換層析介質(zhì)介紹
* 動態(tài)載量的測量條件：4.7 ml 預(yù)裝柱，裝柱高度：10 cm，在保留時間為5分鐘時測量10% 穿透時的動態(tài)結(jié)合能力。測試緩沖液：50 mM 醋酸鈉，pH 5.5(單克隆抗體)。
** 動態(tài)載量測量條件：裝柱高度：10 cm，測試流速600 cm/h ，測試緩沖液：0.1 M 檸檬酸鹽溶液，pH 3.0，測試樣品：4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白樣品，當(dāng) β-乳球蛋白的穿透量達到10% 時，單位介質(zhì)體積(ml) 的 β- 乳球蛋白上樣量(mg)。
*** 動態(tài)載量測量條件：裝柱高度：10 cm，測試流速150 cm/h ，測試緩沖液：0.2 M 磷酸鈉溶液，pH 7.2，測試樣品：4 mg/ml 溶菌酶樣品，當(dāng)溶菌酶的穿透量達到10% 時，單位介質(zhì)體積(ml) 的溶菌酶上樣量(mg)。
MaXtar® S HC作為百林科的明星產(chǎn)品，是一款高載量高分辨率的強陽離子交換層析介質(zhì)，利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對其進行分離。
在抗體的應(yīng)用上有突出的高載量
采用CHO細胞表達的單克隆抗體(精純后蛋白)作為樣品，對MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(動態(tài)結(jié)合載量)進行探索，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC的DBC明顯優(yōu)于MaXtar® SP HR，是其的2倍。實驗條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：CHO細胞表達的單克隆抗體(精純后蛋白)
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.5
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.5
保留時間：5 min
圖1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR 10%
穿透(QB10)曲線
表1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR
在QB10的動態(tài)結(jié)合力
在抗體的應(yīng)用上有突出的高回收率
依據(jù)單抗料液實際載量的80%進行上樣洗脫測試，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC純化后樣品純度達99.4%，收率為92.6%，HCP去除效果很好。實驗條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：陰離子交換層析介質(zhì)純化后的單抗料液
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.12
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.11，0~100%B 20CV
保留時間：5 min
圖2. MaXtar® S HC的結(jié)合洗脫圖譜
表2. MaXtar® S HC的純化結(jié)果
百林科也希望在抗體、ADC及更多領(lǐng)域為客戶提供完善的服務(wù)支持，助力各領(lǐng)域“通達無限可能”。
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