在抗體純化的經(jīng)典三步法
親和捕獲+陽(yáng)離子交換+陰離子交換中
早期已介紹過(guò)百林科陰離子交換層析介質(zhì)
詳見(jiàn)
今天，重點(diǎn)介紹一下百林科陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)。
百林科陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)豐富多樣，依據(jù)基架類(lèi)型，分為MaXtar® 基架和Chromstar® 基架，兩者主要區(qū)別在于耐壓，MaXtar® 基架通常可以耐受0.5MPa壓力，Chromstar®基架可以耐受0.3MPa壓力；根據(jù)配基的類(lèi)型，可以分為SP(強(qiáng)陽(yáng))、S(強(qiáng)陽(yáng))、CM(弱陽(yáng))幾種類(lèi)型。
百林科MaXtar® 基架的
幾種陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)介紹
* 動(dòng)態(tài)載量的測(cè)量條件：4.7 ml 預(yù)裝柱，裝柱高度：10 cm，在保留時(shí)間為5分鐘時(shí)測(cè)量10% 穿透時(shí)的動(dòng)態(tài)結(jié)合能力。測(cè)試緩沖液：50 mM 醋酸鈉，pH 5.5(單克隆抗體)。
** 動(dòng)態(tài)載量測(cè)量條件：裝柱高度：10 cm，測(cè)試流速600 cm/h ，測(cè)試緩沖液：0.1 M 檸檬酸鹽溶液，pH 3.0，測(cè)試樣品：4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白樣品，當(dāng) β-乳球蛋白的穿透量達(dá)到10% 時(shí)，單位介質(zhì)體積(ml) 的 β- 乳球蛋白上樣量(mg)。
*** 動(dòng)態(tài)載量測(cè)量條件：裝柱高度：10 cm，測(cè)試流速150 cm/h ，測(cè)試緩沖液：0.2 M 磷酸鈉溶液，pH 7.2，測(cè)試樣品：4 mg/ml 溶菌酶樣品，當(dāng)溶菌酶的穿透量達(dá)到10% 時(shí)，單位介質(zhì)體積(ml) 的溶菌酶上樣量(mg)。
MaXtar® S HC作為百林科的明星產(chǎn)品，是一款高載量高分辨率的強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)，利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對(duì)其進(jìn)行分離。
在抗體的應(yīng)用上有突出的高載量
采用CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)作為樣品，對(duì)MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(動(dòng)態(tài)結(jié)合載量)進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC的DBC明顯優(yōu)于MaXtar® SP HR，是其的2倍。實(shí)驗(yàn)條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.5
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.5
保留時(shí)間：5 min
圖1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR 10%
穿透(QB10)曲線(xiàn)
表1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR
在QB10的動(dòng)態(tài)結(jié)合力
在抗體的應(yīng)用上有突出的高回收率
依據(jù)單抗料液實(shí)際載量的80%進(jìn)行上樣洗脫測(cè)試，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC純化后樣品純度達(dá)99.4%，收率為92.6%，HCP去除效果很好。實(shí)驗(yàn)條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：陰離子交換層析介質(zhì)純化后的單抗料液
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.12
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.11，0~100%B 20CV
保留時(shí)間：5 min
圖2. MaXtar® S HC的結(jié)合洗脫圖譜
表2. MaXtar® S HC的純化結(jié)果
百林科也希望在抗體、ADC及更多領(lǐng)域?yàn)榭蛻?hù)提供完善的服務(wù)支持，助力各領(lǐng)域“通達(dá)無(wú)限可能”。
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