溫州魚皮膠原蛋白肽生產(chǎn)線*
采用酶法提取膠原蛋白時,必須嚴(yán)格控制提取條件。
首先,酶作用時間必須適當(dāng)。如果時間過短,膠原蛋白,就不能充分釋放到提取液中,影響提取率;如果酶作用時間過長,膠原蛋白會水解過度,產(chǎn)生過多的苦味小分子低聚肽,不僅會增加分離純化的難度,也會影響膠原 蛋白的功能特性和生物活性。
其次,酶解溫度要適宜。溫度過低,酶的作用效果不明顯;溫度過高會引起酶的失活和膠原蛋白的變性。據(jù)報道,當(dāng)介質(zhì)pH略低于中 性時,膠原蛋白的變性溫度為40~41℃,當(dāng)介質(zhì)pH為酸性時,膠原蛋白的變性溫度為38~39℃,而且魚皮膠原蛋白的變性溫度要比豬皮膠原蛋白的變性溫 度低7~12℃。所以,如果要使提取的膠原蛋白具有良好的生物活性,在提取過程中應(yīng)使提取溫度低于變性溫度。
第三,需選用適當(dāng)?shù)拿?。一般從陸生哺乳動物組 織中提取膠原蛋白時,采用胃蛋白酶在其zui適作用溫度下進(jìn)行提取是合理的,但對于魚類等水生動物,由于其膠原蛋白的變性溫度比陸生哺乳動物低,因此許多蛋白 酶便不適用,如果在這些酶的zui適作用溫度下提取可能會破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動物皮及其加工 副產(chǎn)物中,應(yīng)用酶法從動物骨中提取膠原蛋白及其多肽報道較少。
純化
可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法,其中鹽析法、離心法和電泳法zui為常用。由于單一方法難以*分離純化膠原蛋白,實際 操作都是通過復(fù)合法來達(dá)到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl;離心法常選用制備型低溫超速離心機(jī);電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯 酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE),該法既可用于膠原蛋白的分離純化,還可用來測定膠原蛋白分子的相對分子質(zhì)量。像有人用破碎、酶解、鹽析三步法提純蘇 尼特羊骨骼I型膠原蛋白。先去除骨頭里的非膠原物質(zhì),然后往沉淀中10%的胃蛋白酶,在4℃的條件下消化24h,以14000r/min離心40min。 棄沉淀往上清液中加NaCL,使它終濃度達(dá)到0.9moL/L,靜止過夜,再離心,zui后的沉淀就是I型膠原蛋白。
溫州魚皮膠原蛋白肽生產(chǎn)線*酶解膠原蛋白的工藝
主要分為單酶水解法和多酶水解法。多酶水解法又分為混合酶水解法(比如牛胰蛋白酶,鏈霉菌蛋白酶,芽孢桿菌蛋白酶混合)和分步酶水解胃蛋白酶提取膠原蛋白的電泳圖譜法, 酶法提取皮膠原具體實驗工藝及條件的選取通常應(yīng)考慮要開發(fā)的產(chǎn)品對分子量的要求,要得到分子量較小的膠原多肽一般采用多酶水解法。
影響酶解效果的因素主要 有:酶的種類、加酶量、酶解溫度、酶解時間、pH值及料水比。
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