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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321400 | 果膠酶測試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS6321400 | 果膠酶測試盒（比色法） | 50管/24樣 |
測定意義
果膠酶（pectinase）是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
測定原理
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前加入7.5mL試劑一，50℃加熱溶解，用不完的試劑4℃保存一周。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取
1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2．細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 細胞培養(yǎng)液等：直接檢測。
測定操作表
對照管 | 測定管 | |
試劑二（µL） | 120 | 120 |
50℃水浴溫育5min | ||
樣本（µL） | 30 | |
煮沸樣本（µL） | 30 | |
混勻，50℃水浴反應(yīng)30min | ||
試劑三（µL） | 150 | 150 |
沸水浴5min，冰浴冷卻終止反應(yīng)，8000g，4℃，離心10min，蒸餾水調(diào)零，取上清于微量石英比色皿或96孔板測定540nm處吸光值A(chǔ)，△A=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。 | ||
酶活性計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為標準品濃度，mg/mL；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫克蛋白每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每克樣本每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每104細胞每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷細胞數(shù)量
4．細胞培養(yǎng)液
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，0.5h
用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x為標準品濃度，mg/mL；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫克蛋白每小時分解果膠產(chǎn)。生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每克樣本每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每104細胞每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷細胞數(shù)量
4．細胞培養(yǎng)液
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，0.5h
注意事項
試劑二若有沉淀析出，請置于50℃加熱溶解。
測定之前請先做預(yù)實驗，如果吸光值較高或較低，請用提取液做適當?shù)南♂尰蛘呒哟髽颖玖浚⒃谟嬎愎街谐艘韵♂尡稊?shù)或者以實際加入的樣本體積參與計算。
煮沸樣本建議在沸水中煮沸10分鐘，以將酶滅活。
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