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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321351 | 單胺氧化酶(MAO)測試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS6321351 | 單胺氧化酶(MAO)測試盒(比色法) | 50管/48樣 |
測定意義:
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纖維化的程度。此外,MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂,從而引發(fā)多種病癥。
測定原理:
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進(jìn)一步氧化成酸;底物在360nm處有特征吸收峰,測定360nm光吸收下降的速率,計(jì)算MAO活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1管,4℃避光保存。
粗酶液提?。?/p>
稱取約0.1g樣品,加1 mL預(yù)冷的提取液一充分冰浴勻漿,1000g,4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管,10000g,4℃,離心30min,棄上清;加入1mL預(yù)冷的提取液二,震蕩混勻,16000g,4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預(yù)冷的1mL 試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定)。
細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管,10000g,4℃,離心30min,棄上清;加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二,震蕩混勻,16000g,4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL 試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定),取上清置于冰上待測。
血清:直接測定。
測定操作表:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至360nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
酶液(µL) | 20 | |
試劑一(µL) | 180 | 160 |
試劑二(µL) | 20 | 20 |
混勻,于微量石英比色皿/96孔板,對照管調(diào)零,測定360nm處吸光值A(chǔ)1,然后37℃水浴60min,對照管調(diào)零,測定360nm處吸光值A(chǔ)2。ΔA=A1-A2 |
注意:空白管只需測定一次。
MAO活性計(jì)算公式:
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、按蛋白含量計(jì)算
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min / mg prot)= ×V反總÷(V樣× Cpr)÷T= 114×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算:
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min / g 鮮重)=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 114×ΔA÷ W
3、按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每104個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min / 104 cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T
= 114×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
4、按照液體體積計(jì)算
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min /L)=×V反總÷V樣=114×ΔA
ε:底物摩爾消光系數(shù),1460L /mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60min,W:樣本質(zhì)量,g
a.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、按蛋白含量計(jì)算
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1 nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min / mg prot)= ×V反總÷(V樣× Cpr)÷T= 228×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算:
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min / g 鮮重)=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 228×ΔA÷ W
3、按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每104個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min / 104 cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T
= 228×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
按照液體體積計(jì)算
酶活定義:37℃,pH7.6時(shí),每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性(nmol/min /L)=×V反總÷V樣=228000×ΔA
ε:底物摩爾消光系數(shù),1460L /mol /cm; d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60min,W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
1、吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
公司正在出售的產(chǎn)品:
RAG-1 ELISA Kit | G-CSF |
AsAb ELISA Kit | Ly6/神經(jīng)毒su1ELISA試劑盒 |
IV形膠原蛋白α3鏈ELISA試劑盒 | Neurensin2蛋白ELISA試劑盒 |
M-期磷蛋白8ELISA試劑盒 | Pim-2原癌基因ELISA試劑盒 |
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 | 大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒 |
抗甲型肝炎病毒抗體IgMELISA試劑盒 | 人細(xì)胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)ELISA檢測試劑盒 |
人胰蛋白mei原激活肽(TAP)ELISAelisa試劑盒 | N-甲基-D-天冬氨suan受體ELISA試劑盒 |
人氧還原蛋白過氧化物mei4(PRDX4)試劑盒ELISA | 人參染料法PCR鑒定試劑盒 |
卡氏住白細(xì)胞原蟲PCR試劑盒 | 肉毒桿菌A型(CB-A)核suan檢測試劑盒 |
乙型肝炎病毒G型PCR試劑盒 | 人腺病毒A亞屬PCR試劑盒 |
阿爾萊特葡萄球菌PCR檢測試劑盒 | 錦鯉皰疹病毒PCR試劑盒 |
解脲支原體PCR檢測試劑盒 | L-Selectin/CD62L 大鼠L選擇suELISA檢測試劑盒 |
Cerberus蛋白(CER)ELISA試劑盒 | 卡他莫拉菌PCR試劑盒 |
CDK-4 人周期su依賴性激4ELISA檢測試劑盒 | 溶血梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒 |
胸腺因子(TF)ELISA試劑盒 | CD45分子(CD45)ELISA試劑盒 |