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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
AS6321126 | ATP含量測(cè)試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS6321126 | ATP含量測(cè)試盒（比色法） | 50管/24樣 |
測(cè)定意義：
ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。
測(cè)定原理：
肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量，以此反應(yīng)ATP含量。
自備儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制：
酸性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
堿性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑二：液體1.5mL×1支，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：液體25mL×1瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)液：液體10mL×1瓶，2μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存；
ATP提取：
1、血清（漿）中ATP的提取：按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL酸性提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。
2、組織中ATP的提取：按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。
3、細(xì)胞或細(xì)菌中ATP的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：酸性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL酸性提取液），超聲波破碎1min（冰浴，強(qiáng)度20％或200W，超聲2s，停1s），8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到700nm，蒸餾水調(diào)零。
2、顯色劑的配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用顯色劑體積（樣本數(shù)×0.2 m L），按試劑四(mL)：試劑五（mL）=1：5的比例配制。用多少配多少。
3、樣本測(cè)定：
試劑名稱(chēng)(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 10 | 10 | ||
標(biāo)準(zhǔn)液 | 10 | 10 | ||
試劑一 | 20 | 20 | ||
試劑二 | 10 | 10 | 10 | 10 |
試劑三 | 10 | 10 | ||
蒸餾水 | 30 | 30 |
充分混勻，37℃準(zhǔn)確水浴30min
顯色劑 | 200 | 200 | 200 | 200 |
37℃水浴20min后，700nm下測(cè)定各管吸光值
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管通常只需要各做一個(gè)。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
ATP含量計(jì)算：
1、血清（漿）中ATP含量計(jì)算
ATP含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ATP含量計(jì)算
（1）按蛋白濃度計(jì)算
ATP含量(μmol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr）=2×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr
蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。
（2）按樣本鮮重計(jì)算
ATP含量(μmol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=4×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
ATP含量(μmol/104 cell）=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.008×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，2μmol/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；V2：加入提取液體積，2mL；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL； W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
注意：檢測(cè)限為10nmol/mL或10nmol/g鮮重或0.1nmol/mg prot
公司正在出售的產(chǎn)品：
DBH ELISA Kit | ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A3ELISA試劑盒 |
anti-papillomavirus type 17(HPV17)antibody(IgG)ELISA Kit | c-Jun氨基末端激mei/應(yīng)急激活的蛋白meiELISA試劑盒 |
CD10分子ELISA試劑盒 | Derlin2蛋白ELISA試劑盒 |
Cullin5蛋白ELISA試劑盒 | G蛋白α抑制活性多肽3ELISA試劑盒 |
大鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒 | 大鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
腺苷suan環(huán)化mei9ELISA試劑盒 | 人組織蛋白meiB(CTSB)ELISA試劑盒 |
人白介su3(IL-3)試劑盒ELISA | EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成mei抗體ELISA試劑盒 |
雞脂多糖/內(nèi)毒su(LPS)檢測(cè)試劑盒elisa | 綿羊星狀病毒1型RT-PCR試劑盒 |
滑液支原體PCR檢測(cè)試劑盒 | 胎兒彎曲桿菌PCR試劑盒 |
馬毛癬菌PCR試劑盒 | 麝源性成分PCR試劑盒 |
克氏食道線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 | 花椒探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 |
鏈狀帶絳蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 | Hsp-60 大鼠熱休克蛋白60ELISA檢測(cè)試劑盒 |
BNP 人腦鈉su/腦鈉尿肽ELISA檢測(cè)試劑盒 | 花生PCR檢測(cè)試劑盒 |
BMPR-Ⅱ 小鼠骨成型蛋白受體ⅡELISA檢測(cè)試劑盒 | 索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
型受體α7(CHRNα7)ELISA試劑盒 | BLI 小鼠β內(nèi)酰胺抑制劑ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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