概述
這個呋喃唑酮ELISA檢測試劑盒用于定量檢測樣品中的呋喃唑酮代謝產(chǎn)物的含量。如果要確證，可以采用傳統(tǒng)的檢測方法如：HPLC, GC/MS。
原理
這個呋喃唑酮（AOZ）ELISA檢測試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫，應(yīng)用于測定呋喃唑酮。在微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)和樣品，再加入AOZ-HRP酶結(jié)合物，微孔板包被有呋喃唑酮（AOZ）特異性抗體。這時樣品中的呋喃唑酮和呋喃唑酮酶結(jié)合物競爭于包被在微孔板上的呋喃唑酮抗體結(jié)合。這個反應(yīng)進行30min。經(jīng)過洗板步驟，加入底物（顯色劑）。通過顯色劑來檢測呋喃唑酮。底物（顯色劑）含有雙氧水和TMB。結(jié)合到呋喃唑酮抗體上的AOZ-HRP酶結(jié)合物催化底物產(chǎn)生有色物質(zhì)。經(jīng)過一個反應(yīng)期加入稀酸（終止液）終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀讀數(shù)。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定樣品中AOZ的含量。因為AOZ-HRP酶結(jié)合物和樣品中的AOZ是競爭關(guān)系所以顯色的深淺和樣品中呋喃唑酮的含量成反比。
性能數(shù)據(jù)
敏感性：魚、蝦、雞 0.1 ppb；混合飼料 0.3 ppb
選擇性：這個試劑盒只能測呋喃唑酮不能測定類似的化合物
樣品：需要通過處理樣品來消除基質(zhì)效應(yīng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線：測定時靠近曲線的中間部位取值更為準(zhǔn)確。
重復(fù)性：標(biāo)準(zhǔn)的變異系數(shù)（CVs） <10%；樣品的變異系數(shù)（CVs） <15%；
交叉反應(yīng)：
Furazolidone （AOZ） *
Furaltadone （AMOZ） <0.01%
Semicarbazide （SEM） <0.01%
1-aminohydantoin （AHD） <0.01%
試劑盒組成
1、真空包裝微孔板（12×8條），包被有AOZ抗體
2、7瓶呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為0, 0.0125, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 和0.5 ppb, 每瓶1ml。（已經(jīng)衍生化）
3、呋喃唑酮-HRP酶標(biāo)記物 12ml
4、樣品處理緩沖液（10X ）濃縮，50ml，用于稀釋樣品。
5、洗液/樣品稀釋液（10X ）濃縮，50ml，
6、衍生化試劑 12ml
7、1瓶16mL底物（TMB）
8、1 瓶12mL終止液.
步驟
1、在對應(yīng)的微孔中加入25 μL 標(biāo)準(zhǔn)或衍生化的樣品。做重復(fù)。
2、用排槍在每個孔中都加入100μL酶標(biāo)記物、然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。
3、在室溫下孵育30分。
4、將孔里的液體倒入合適的容器中，每個微孔至少加入250μL、1×洗液，然后棄掉洗液到合適的容器中，重復(fù)洗3次，共四次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。
5、使用排槍在每個孔中加入100μL底物顯色液，然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。在室溫孵育20分。盡量使其不見光。
6、每孔加入100μL終止液。
7、在加入終止液15分鐘時間內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。
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