1．說明
本檢測采用酶聯(lián)免疫法定量檢測神經(jīng)性貝毒的存在。神經(jīng)性貝毒是一種毒素，與貝殼類動物的神經(jīng)中毒有關(guān)。本檢測可用于水產(chǎn)樣本對貝類毒素的定性和定量檢測，例如甲殼類動物的樣本。對于甲殼類動物的需要提前制備樣本。如果條件允許，陽性樣本可以做HPLC，GC/MS或其他方法確認。
2．安全性說明
標準品溶液含有少量的神經(jīng)性貝毒。底物溶液含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液還有稀硫酸。避免皮膚與粘膜與終止液接觸。若終止液與皮膚接觸，可用水洗去。
3．貯藏與穩(wěn)定性
試劑盒貯存在4-8°C。使用前試劑盒中溶液要恢復(fù)到室溫20—25度。在保質(zhì)期內(nèi)試劑盒都可以正常使用。
4．檢測原理
本實驗采用直接競爭ELISA方法，用特異性抗體識別神經(jīng)性貝毒。樣本中的神經(jīng)性貝毒可與貝毒-酶-結(jié)合物競爭，同包被在微孔板上的羊抗-神經(jīng)性貝毒抗體結(jié)合。洗板加入底物溶液，顯藍色。藍色的深度與神經(jīng)性貝毒在樣本中的濃度成反比。顏色反應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)終止，顏色用酶標儀讀值。每孔的樣本濃度值可以通過標準曲線來讀取。
A 試劑盒包括
1. 包被綿羊抗-神經(jīng)性貝毒的酶標板
2. 標準品PbTx-3 （8）: 0, 0.010, 0.025, 0.05, 0.1, 0.25, 0.5, 2.0 ng/ml
3. 辣根過氧化酶（HRP）-神經(jīng)性貝毒結(jié)合物，6ml
4. 濃縮的樣本稀釋液（1X）2 X 30ml,用于稀釋樣本
5. 濃縮的洗液（5X），100ml
6. 顯色液（TMB）,12ml
7. 終止液，2 X 6ml
8.海水前處理溶液25ml
C 檢測步驟
1. 按照既定計劃，在放置有酶標條的孔中加入標準品溶液或者海水或者甲殼類樣本提取液50цl。*做雙份或者三分重復(fù)。
2. 用多道移液器或者可調(diào)移液器連續(xù)加入50цl的酶結(jié)合物于各微孔孔中。封板，放置在振蕩器上震蕩30秒。防止濺出。室溫孵育60分鐘。
3. 孵育完畢，揭開板子，強烈搖起板孔中的沉淀。1X洗液洗板3次。每孔每次zui少用250цl的洗液洗滌。殘留的液體需要放置在干凈的紙上拍干。
4. 每孔加入100цl的底物溶液。室溫30分鐘孵育。避免直接光照。
5. 按照加入底物溶液的順序，每孔依次加入100цl的終止液。
6. 加入終止液后15分鐘內(nèi)450nm讀取吸光值。
D 結(jié)果分析
結(jié)果分析可以利用商業(yè)ELISA分析軟件（4-parameters,Logit/Log）。手工計算可以先計算標準的吸光度值的平均值，然后計算每個標準的%B/B0（用其它標準的吸光度值除以零標準的吸光度值乘以*）。以每個標準的%B/B0做Y軸，以每個標準的神經(jīng)性貝毒的濃度做X軸構(gòu)建標準曲線。通過利用標準曲線，把對照和樣品的%B/B0代入標準可以計算出樣品中神經(jīng)性貝毒的濃度。樣品中神經(jīng)性貝毒的含量小于0.01 ppb認為陰性。當(dāng)樣品中神經(jīng)性貝毒的含量大于2.0 ppb要稀釋后再測定。
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