一、促進(jìn)組織再生功效評價
【評價原理】
機(jī)械損傷將產(chǎn)生皮膚組織的結(jié)構(gòu)性破壞，斑馬魚尾鰭具有自我再生功能，通過對尾鰭再生速度的觀察可以評價受試物促進(jìn)組織再生功效。
【實驗方案】
將斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和供試品組。正常對照組不做處理，模型對照組和供試品組均采用手術(shù)方法定量切斷尾鰭，從而完成造模處理，供試品組中添加一定濃度的受試化妝品。避光孵育一段時間后，將各組斑馬魚在體視顯微鏡下拍照并保存圖片，用高級圖像分析軟件對斑馬魚尾鰭面積進(jìn)行定量分析，以尾鰭面積的增量評價受試化妝品促進(jìn)組織再生功效。
【結(jié)果展示】
斑馬魚尾鰭面積
圖1. 斑馬魚尾鰭面積表型圖
紅色區(qū)域為分析區(qū)域
可以看到，孵育相同時間后，供試品組斑馬魚尾鰭面積明顯大于模型對照組，說明該化妝品具有促進(jìn)組織再生功效。
【評價結(jié)論】
1.經(jīng)過斑馬魚對比實驗，供試品組與模型對照組相比，斑馬魚尾鰭面積明顯增加。
2.本實驗證實了該化妝品具有促進(jìn)組織再生功效。
二、促進(jìn)傷口愈合（抗炎）功效評價
【評價原理】
斑馬魚幼魚的再生能力非常強(qiáng)大：切斷尾鰭后，傷口立即緊縮、上皮細(xì)胞覆蓋，數(shù)小時內(nèi)便出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，傷口處中性粒細(xì)胞的數(shù)量可以反映炎癥反應(yīng)的程度。轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞熒光斑馬魚的中性粒細(xì)胞可在熒光顯微鏡下被明顯觀察，因此可以通過實時觀察斑馬魚傷口附近的中性粒細(xì)胞數(shù)量評價受試物的抗炎功效。
【實驗方案】
將斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和供試品組。正常對照組不做處理，模型對照組和供試品組均采用手術(shù)方法定量切斷尾鰭，從而完成造模處理，供試品組中添加一定濃度的受試化妝品。避光孵育一段時間后，將各組斑馬魚在熒光顯微鏡下拍照并保存圖片，用高級圖像分析軟件對斑馬魚尾鰭損傷部位的中性粒細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，以中性粒細(xì)胞相比于模型對照組的減少量評價受試化妝品促進(jìn)組織再生功效。
此外，可通過Q-PCR檢測IL-1β、IL-6和IL-10等炎癥因子的表達(dá)，通過相關(guān)炎癥因子表達(dá)量的降低評價受試化妝品的抗炎功效。
【結(jié)果展示】
1、尾鰭損傷部位中性粒細(xì)胞（推薦）
圖2 斑馬魚尾鰭中性粒細(xì)胞表型圖
黃色虛線區(qū)域為計算區(qū)域，綠色熒光點為中性粒細(xì)胞
可以看到，供試品組斑馬魚的中性粒細(xì)胞數(shù)目比模型對照組明顯減少。
2、炎癥因子的表達(dá)量（提供柱狀圖）
【評價結(jié)論】
1.經(jīng)過各組斑馬魚的對比實驗，水溶給予供試品組的斑馬魚中性粒細(xì)胞數(shù)目及炎癥因子的相對表達(dá)量與模型對照組相比明顯減少。
2.本實驗證實了該供試品具有促進(jìn)傷口愈合（抗炎）功效。
三、促進(jìn)傷痕淡化
【評價原理】
冰乙酸對皮膚傷口具有一定的損傷作用，斑馬魚皮膚表面被注射冰乙酸后，傷口部位將出現(xiàn)色素的聚集，口修復(fù)過程中色素含量逐漸減少。通過觀察對傷口部位的色素含量的減少量可以評價受試物對傷口的愈合作用。
【實驗方案】
將斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和供試品組。正常對照組不做處理，模型對照組和供試品組均采用注射方式在斑馬魚軀干部位定量注射冰乙酸，受試化妝品以一定濃度水溶添加到供試品組中。各實驗組在避光條件下孵育一段時間后，在顯微鏡下拍照保存圖片，用高級圖像處理軟件分析斑馬魚傷口部位色素的不透光總和，計算供試品組相對于模型對照組的色素減少量，從而評價受試化妝品的促進(jìn)傷口愈合功效。
【結(jié)果展示】
圖3 斑馬魚軀干色素表型圖
可以看到，供試品組斑馬魚軀干部位的色素含量比模型對照組明顯減少。
【評價結(jié)論】
1.經(jīng)過各組斑馬魚的對比實驗，水溶給予供試品組的斑馬魚軀干部位色素含量與模型對照組相比明顯減少。
2.本實驗證實了該供試品具有促進(jìn)傷痕淡化功效。
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