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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321186 | 肝脂酶（HL）測試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS6321186 | 肝脂酶（HL）測試盒（比色法） | 50管/24樣 |
測定意義
肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實質(zhì)細(xì)胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面和竇周間隙腔面的肝細(xì)胞微絨毛表面，可促進脂蛋白中的膽向類固醇激素轉(zhuǎn)化，血漿中的HL活性增高時，血漿中小顆?？蓪?dǎo)致LDL水平升高，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生。
測定原理
肝酯酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚，可與固藍B鹽形成紫紅色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝酯酶活性成正相關(guān)。
自備實驗用品及儀器
天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制
試劑一：液體110mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體8mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理
組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。
血清：直接測定。
測定操作
對照管 | 測定管 | |
樣品（μL） | 20 | 20 |
試劑一（μL） | 90 | 80 |
試劑二（μL） | 10 | |
混勻，30℃水浴10min | ||
試劑三（μL） | 80 | 80 |
試劑四（μL） | 10 | 10 |
充分混勻，30℃靜置5min，于微量石英比色皿/96孔板，測定595nm處吸光值，記為A對照管和A測定管，△A=A測定管- A對照管 | ||
計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 6.58×（△A+0.1241）÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 6.58×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷V樣÷T
= 6.58×（△A+0.1241）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
b．用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.076 x -0.1241，R2=0.9994
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 13.16×（△A+0.1241）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 13.16×（△A+0.1241）÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 13.16×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.076×V反總÷V樣÷T
= 13.16×（△A+0.1241）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
公司正在出售的產(chǎn)品：
IDO ELISA Kit | CD109分子ELISA試劑盒 |
Anti-Thrombin Ⅲ antibody ELISA Kit | Dermokine蛋白ELISA試劑盒 |
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