本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321181 | 脂肪酶(LPS)測試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS6321181 | 脂肪酶(LPS)測試盒(比色法) | 50管/48樣 |
測定意義:
LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計(jì)算LPS活性。
自備儀器和用品:
研缽、臺式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體65mL×2瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三:甲苯80mL×1瓶,4℃保存(自備)。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體10 μL×1瓶,10 µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯,充分溶解。
粗酶液提?。?/p>
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后12000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
血清等液體: 直接檢測。
LPS測定操作:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到710 nm,蒸餾水調(diào)零。
試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min。
在1.5mL EP管中依次加入下列試劑
試劑名稱(μL) | 空白管 | 測定管 |
蒸餾水 | 150 | |
樣本 | 50 | |
試劑一 | 300 | 300 |
試劑二 | 100 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
試劑三 | 800 | 800 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min后,8000g,25℃,離心10min,取上清液
試劑名稱(μL) | 空白管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
上清液 | 400 | 400 | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 400 | ||
試劑四 | 100 | 100 | 100 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后,靜置5min,取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板,于710nm處測定吸光值。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
LPS活性計(jì)算公式:
1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)- A空白管)]×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷W
(3)按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:37℃中每104個細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷細(xì)胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義:37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]
C標(biāo)準(zhǔn)品:10 µmol/mL;V反總:反應(yīng)總體積,0.8mL;V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒;W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,10 min。
公司正在出售的產(chǎn)品:
MR ELISA Kit | CC趨化因子7ELISA試劑盒 |
Anti-Survivin Antibody(Anti-Surv)ELISA Kit | Dendrin蛋白ELISA試劑盒 |
Cullin2蛋白ELISA試劑盒 | FK506結(jié)合蛋白5ELISA試劑盒 |
EB病毒早期抗原ELISA試劑盒 | Kindlin3蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)試劑盒 ELISA | 大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒 |
胎盤堿性磷suanmeiELISA試劑盒 | 人早期生長反應(yīng)因子1(EGR1)檢測試劑盒elisa |
人垂體腺苷suan環(huán)化mei激活肽(PACAP)ELISA試劑盒 | G蛋白偶合受體44ELISA試劑盒 |
雞5核苷suanmei(5-NT)試劑盒elisa | 青霉通用PCR試劑盒 |
霍亂弧菌通用PCR試劑盒 | 水貂病毒性腸炎病毒PCR試劑盒 |
羊闊盤吸蟲PCR試劑盒 | 鰓霉屬通用PCR試劑盒 |
皮欽德病毒PCR檢測試劑盒 | 霍山石斛PCR試劑盒 |
亮熱厲螨PCR檢測試劑盒 | Kim-1 大鼠腎損傷分子1ELISA檢測試劑盒 |
C/EBPβ 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白βELISA檢測試劑盒 | 雞白痢沙門氏菌PCR試劑盒 |
B-黑色su瘤抗原(BAGE)ELISA試劑盒 | 鼠疫桿菌(YP-PLA/CA/3A)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒 | B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC1)ELISA試劑盒 |