本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632162 | 超氧陰離子測試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS632162 | 超氧陰離子測試盒(比色法) | 50管/48樣 |
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導(dǎo)的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用,導(dǎo)致機體細胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。
測定原理:
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-在對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據(jù)ΔA值可以計算樣品中O2-含量,反應(yīng)式為NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自備實驗用品及儀器:
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體110mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:氯仿,自備。
超氧陰離子提取
植物、動物組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后,10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
血清或培養(yǎng)液:直接測定。
測定操作表
分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至530nm。
操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 200 | |
提取液(μL) | 200 | |
試劑一(μL) | 160 | 160 |
混勻,37℃水浴20min | ||
試劑二(μL) | 120 | 120 |
試劑三(μL) | 120 | 120 |
混勻,37℃水浴20min | ||
試劑四(μL) | 200 | 200 |
混勻,8000g,25℃,離心5min,小心吸取上層水相200μL于微量石英比色皿/96孔板中,測定A530。ΔA=A測定-A空白,空白管只要做一管。 |
超氧陰離子含量計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980
1. 組織:
(1)按照樣本質(zhì)量計算
超氧陰離子含量(nmol/g 鮮重)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/ g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)濃度計算
超氧陰離子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/ mg prot·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌,真菌:
超氧陰離子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/104 cell·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/mL·min)= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V樣總:加入提取液體積,1 mL; V反總:反應(yīng)總體積,0.36mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.2mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,20min;2: 2分子O2-參與反應(yīng)生成1分子NO2-。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0121x - 0.0027,R2 = 0.9980
1. 組織:
(1)按照樣本質(zhì)量計算
超氧陰離子含量(nmol/g 鮮重)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/ g·min)=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)濃度計算
超氧陰離子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/ mg prot·min)= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌,真菌:
超氧陰離子含量(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/104 cell·min)=297.52× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷細胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量(nmol/mL)=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反總÷V樣×2
=297.52×(ΔA+0.0027)
超氧陰離子產(chǎn)生速率(nmol/mL·min)= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T
=14.88×(ΔA+0.0027)
V樣總:加入提取液體積,1 mL; V反總:反應(yīng)總體積,0.36mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.2mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,20min;2:2分子O2-參與反應(yīng)生成1分子NO2-。
注意事項
OD值大于1,樣品適當(dāng)稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
樣品制備好后,立刻進行測定,請勿將樣品進行長時間的低溫保存,以免影響測定結(jié)果。
試劑四有一定的毒性,請操作時做好防護措施。
公司正在出售的產(chǎn)品:
LZM ELISA Kit | Ⅰ型膠原羧基端肽ELISA試劑盒 |
anti-hepatitis A virus antibody IgG,anti-HAV-IgG ELISA Kit | BMP激活su膜結(jié)合抑制因子同源物ELISA試劑盒 |
Archease蛋白ELISA試劑盒 | CD28分子ELISA試劑盒 |
cAMP和cAMP抑制cGMP | Duffy血型趨化因子受體ELISA試劑盒 |
大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA檢測試劑盒 | 大鼠Smad1 ELISA檢測試劑盒 |
血小板反應(yīng)蛋白解整合su金屬肽mei9ELISA試劑盒 | 雞白介su3(IL-3)elisa試劑盒 |
人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)試劑盒elisa | CopineⅧ蛋白ELISA試劑盒 |
豬雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒 | 庫皮科斯病毒RT-PCR試劑盒 |
鮭腎桿菌PCR試劑盒 | 兔出血癥病毒2型(RHDV-2)核suan檢測試劑盒 |
豬布魯氏桿菌PCR試劑盒 | 豎琴奧斯特線蟲PCR試劑盒 |
龜分枝桿菌PCR檢測試劑盒 | 海鷗彎曲桿菌PCR試劑盒 |
不明血吸蟲PCR檢測試劑盒 | MBP 大鼠髓磷脂堿性蛋白ELISA檢測試劑盒 |
Bcl-2 兔子B細胞淋巴瘤因子2ELISA檢測試劑盒 | 鮭腎桿菌PCR檢測試劑盒 |
BAX 人Bcl-2相關(guān)X蛋白ELISA檢測試劑盒 | 銅綠假單孢菌(PA)/綠膿桿菌 核suan檢測試劑盒 |
胰島su生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)ELISA試劑盒 | Aβ1-40 大鼠β淀粉樣蛋白1-40ELISA檢測試劑盒 |