適用
本試劑盒適用于水產(chǎn)品中孔雀綠的定量檢測。
原理
本試劑盒原理是競爭酶聯(lián)免疫檢測方法，利用萃取劑從樣品中提取到孔雀石綠. 在固相載體微孔板中加入標(biāo)準(zhǔn)和處理的樣品，然后加入孔雀石綠抗體，反應(yīng)30分鐘后洗板，然后加入HRP標(biāo)記的孔雀石綠孵育30分后洗板，洗滌后加入顯色劑，結(jié)合的酶將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物；加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色；在450nm波長進(jìn)行檢測，樣品中的孔雀石綠濃度與吸收光強(qiáng)度成反比 。
特異性
與孔雀石綠類似物的交叉反應(yīng)
| Compound % | CR |
| Malachite green 孔雀石綠 | * |
| Leucomalachite 隱色孔雀綠 | 1% |
| Crystal Violet 結(jié)晶紫 | 120% |
| Leucocrystal Violet 隱色結(jié)晶紫 | 2% |
檢測限
0.01 ppb
試劑盒組成
96孔酶標(biāo)板：1塊（8×12條）。
標(biāo)準(zhǔn)品貯備液（Standard）: 1瓶（0.4ml/瓶），100ppb。
標(biāo)準(zhǔn)品貯備液（Standard）: 1瓶（0.4ml/瓶），100ppb。
酶標(biāo)記物：1瓶（25倍, 0.8ml）HRP標(biāo)記的孔雀石綠結(jié)合物
孔雀石綠抗體：1瓶（9ml）
底物顯色液：1瓶（16ml）
終止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。
結(jié)合物稀釋液：1瓶（15ml）。
樣本稀釋緩沖液：2瓶（25ml）
濃縮洗滌液：1瓶（5倍， 100ml/瓶）、酶標(biāo)板的洗滌。
使用說明書
操作步驟
1. 使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來使其達(dá)到室溫。裝有洗液的洗瓶。
2．從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3. 用移液器吸取75 μl 樣品處理物到對應(yīng)的測試孔 ，同時在每個孔中都加入75 μl 抗體溶液。
4. 輕輕震動30秒使其混勻孵育30分。
5. 孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板緩沖液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震蕩洗滌后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。拍板，去掉殘留的洗液。
6. 每個孔加入150 μL 酶標(biāo)結(jié)合物.
7. 輕輕震動30秒使其混勻孵育30分
8. 孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板緩沖液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震蕩洗滌后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。拍板，去掉殘留的洗液。
9. 每個孔加入150 μL 底物.孵育30分
10. 每孔加入 100 μL 終止液.
11. 450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）
結(jié)果分析
1．半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的孔雀石綠含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度，樣品的吸光度值高于某個標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的孔雀石綠含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度。
2．定量結(jié)果判定，需要以標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù)為Y軸繪制曲線圖，將標(biāo)準(zhǔn)濃度吸光度值的點(diǎn)用直線連接，樣品的吸光度值也位于這條直線上，根據(jù)樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應(yīng)樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于zui小標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值或小于zui大標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，即可說明此樣品中孔雀石綠的含量小于0.01ppb或大于1ppb。
3. 當(dāng)樣品的濃度高于1ppb 時要調(diào)節(jié)稀釋倍數(shù)來獲得zui終的濃度。
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