商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
Bst 4.0 Basic Mix(with UDG) | 100T、2000Tx25μl | A-PJ1013 |
產(chǎn)品介紹:
該制品為雙組分的試劑,Basic Buffer Mix 包含了反應(yīng)緩沖液、Mg2+、dU/A/C/GTP(不含 dTTP)、凍干賦形劑,酶 Mix 包含 Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶、熱敏 UDG。得益于 Bst 4.0 識別 dUTP 底物,反應(yīng)底物中不包含dTTP,因此擴增產(chǎn)物均為 dUTP 產(chǎn)物,在配合熱敏 UDG的情況下,實現(xiàn)防污染性能。在實際測試中,含有 10e5Copies 的污染物的條件下,抑制污染擴增。本制品尤其適用于開蓋的 LAMP 反應(yīng)(如試紙條檢測)、密封腔體(污染風(fēng)險較高)的檢測試驗(如定量 PCR腔體)。
試劑使用特點:
(1)Basic Buffer Mix 中不含染料,可自行添加 SYBR Green、Eva Green 等染料進行熒光檢測。
(2)本試劑適用于開蓋檢測如核酸試紙條檢測。
(3)試劑中含有凍干賦形劑,試劑可直接凍干,無需再優(yōu)化凍干配方。
儲存:-20℃保存 1 年;-80℃保存 2 年;短期使用放置于2-8℃,保存 1 個月。反復(fù)凍融 10 次,不影響使用。如有白色沉淀,于 37℃水浴放置 10min 后溶解沉淀,不影響使用。
使用方法:
1. 配制 LAMP 反應(yīng)體系
2.5xBst4.0 Basic BufferMix 10 μl
25xBst4.0/UDG Enzyme 1 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。
注意:如何應(yīng)用核酸試紙條進行特異性檢測,可來信咨詢。
2. 反應(yīng)體系配好后,室溫(25-37°C)放置 2min,以消化去除潛在的核酸污染,隨后置于 65°C 進行反應(yīng)15~30min。
試劑凍干策略(有凍干經(jīng)驗人員操作):
1. 配制 LAMP 凍干體系
2.5xBst4.0 Basic BufferMix 10 μl
25xBst4.0/UDG Enzyme 1 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
ddH2O 到體積 1.5 μl
凍干總體積 15 μl
2. 體系配制完畢后,加入 0.2 ml EP 管進行上機凍干。該試劑的凍干體積為 15 μl, 檢測反應(yīng)體積為 25 μl。
特別說明:
(1)本試劑防污染原理為:熱敏 UDG 消化去除含有 dUTP的擴增產(chǎn)物,熱敏 UDG 在隨后 50℃以上迅速失活,并不影響后續(xù) LAMP 擴增。因此,本試劑無法去除采用 dTTP擴增的污染物,也不能消化天然的核酸底物(DNA/RNA)。為避免擴增氣溶膠污染,實驗室應(yīng)長期使用本試劑進行實驗,一旦使用 dTTP 試劑擴增后,造成實驗室污染,采用本試劑不會消除假陽性擴增。
(2)本試劑適用基于 OG 染料變色法、SYBR Green 法、基于 Biotin/FAM 探針的核酸膠體金法( 具有膠體金法特異性使用策略,如需技術(shù)支持,請來信咨詢)。本試劑不支持 HNB、pH 顯色法。其它使用策略自行優(yōu)化調(diào)整。
(3)基于本試劑, 提供凍干制備服務(wù)。八聯(lián)管起訂量 480T,凍干球起訂量 2000T。
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