過(guò)敏反應(yīng)通常會(huì)引起許多皮膚癥狀,比如皮膚發(fā)紅、發(fā)癢,嚴(yán)重的患者還會(huì)出現(xiàn)刺痛或者面部出現(xiàn)紅斑、風(fēng)團(tuán)、丘疹或丘皰疹等癥狀。敏感性肌膚的人群選用化妝品時(shí),需要特別關(guān)注化妝品的致敏性。通過(guò)斑馬魚(yú)技術(shù)可以有效評(píng)價(jià)化妝品及其原料的致敏性。
【評(píng)價(jià)原理】
過(guò)敏反應(yīng)的主要原因是過(guò)敏原/致敏因子誘導(dǎo)組織學(xué)上肥大細(xì)胞脫顆粒,釋放多種活性介質(zhì)進(jìn)而誘發(fā)各種過(guò)敏癥狀。其中類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞內(nèi)預(yù)先合成的中性蛋白酶,是臨床上檢驗(yàn)人體是否過(guò)敏的重要指標(biāo)。斑馬魚(yú)產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)時(shí),同樣會(huì)誘導(dǎo)肥大細(xì)胞分泌類胰蛋白酶。因此,通過(guò)檢測(cè)斑馬魚(yú)整體類胰蛋白酶水平可以判斷化妝品及其原料的致敏性。
【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成若干組組,包含正常對(duì)照組和化妝品組。其中正常對(duì)照組未加入化妝品,化妝品組分別加入不同劑量(化妝品通過(guò)溶解到標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中的方式添加到實(shí)驗(yàn)體系中)的樣品。
處理24 h后,利用酶標(biāo)儀檢測(cè)各組吸光度值(OD值),以類胰蛋白酶的表達(dá)水平評(píng)價(jià)化妝品致敏作用。
此外,可以通過(guò)斑馬魚(yú)病理切片,用PAS染色后觀察腸道壁上肥大細(xì)胞的狀況反映化妝品的致敏性。
【結(jié)果展示】(展示圖片僅供參考,實(shí)際實(shí)驗(yàn)組別依據(jù)合同而定)
圖1. 斑馬魚(yú)類胰蛋白酶含量(吸光度值)
與正常對(duì)照組比較,*p < 0.05,***p < 0.001
可以看到,化妝品中劑量和高劑量組類胰蛋白酶含量與正常對(duì)照組比較明顯升高,具有致敏性,低劑量組無(wú)致敏性。
圖2. 斑馬魚(yú)體內(nèi)肥大細(xì)胞染色典型圖(箭頭指示為肥大細(xì)胞)
從經(jīng)過(guò)PAS染色的病理切片中也能看出來(lái),化妝品組斑馬魚(yú)的腸道壁上的肥大細(xì)胞與正常對(duì)照組相比數(shù)量明顯增加。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過(guò)各組斑馬魚(yú)的對(duì)比實(shí)驗(yàn),化妝品中、高劑量組斑馬魚(yú)類胰蛋白酶含量和腸道壁上的肥大細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組相比數(shù)量明顯增加。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該化妝品具有明顯的致敏作用。